丁基瓊脂糖微球（Butyl Bio-Sep 4B）
產(chǎn)品說明書
丁基瓊脂糖微球是將丁基鍵合在4B瓊脂糖微球上形成的一種可利用疏水相互作用來實現(xiàn)目標(biāo)產(chǎn)品純化分離的疏水類介質(zhì)。用于生物大分子和乙肝疫苗的純化分離。
1.外觀
本品為白色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質(zhì)。
2.理化指標(biāo)
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項 目 |
指 標(biāo) |
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配 基 |
丁 基 |
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基 質(zhì) |
4%瓊脂糖微球 |
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顆粒形狀及大小 |
球形 45~160 μm |
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配基密度 |
6~14μmol/ml介質(zhì)** |
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Cl-容量 |
1.6~4.0μmol/ml介質(zhì)** |
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蛋白質(zhì)吸附量 |
>30mgHSA/ ml膠 |
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最高流速 |
30 cm/h* |
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耐壓 |
0.01 MPa |
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化學(xué)穩(wěn)定性 |
pH3~12.5中穩(wěn)定;0.1%triton水溶液和1%MOPS溶液中穩(wěn)定；5%甲醛中基本穩(wěn)定 |
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耐熱 |
45℃以下微球無變化，注意不能冷凍，不能高壓滅菌 |
*檢測條件： 層析柱10mm×300mm *柱床高15cm,25℃, 流動相為0.1mol/LNaCl
3.微生物指標(biāo)
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項 目 |
單 位 |
指標(biāo)要求 |
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菌落群數(shù) |
cfu/ml |
< 100 |
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大腸菌數(shù) |
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< 100 |
4．包裝
產(chǎn)品以聚胺酯瓶密封包裝，外貼標(biāo)簽，注明“品名、體積、顆粒大小、保質(zhì)期、批號、生產(chǎn)日期、生產(chǎn)單位及地址” 等內(nèi)容。所選用的包裝應(yīng)有利于保證產(chǎn)品質(zhì)量、方便運輸和貯存。
5. 運輸
運輸中應(yīng)避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運。
6. 貯存
產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~30℃（保存溶液為20% 乙醇+0.1M醋酸鈉），通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能冷凍。
用過的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。
7.保質(zhì)期：暫定5年。
8.應(yīng)用
丁基瓊脂糖微球是一種疏水層析介質(zhì)，利用樣品中組分疏水性的不同進(jìn)行分離。用于乙肝疫苗和其他生物大分子的純化分離。
下面簡要介紹介質(zhì)的使用過程。
8.1 裝柱
⑴讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。
⑵根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿。勻漿作脫氣處理。
⑶將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務(wù)必使底端無氣泡。
⑷用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。
⑸ 打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
9.2平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS中加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。
9.3上樣
⑴樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。
⑵一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。
⑶介質(zhì)對樣品組分吸附的程度取決于介質(zhì)配基的疏水性、樣品的疏水性質(zhì)、流動相的離子強(qiáng)度和溫度。鹽濃度大、溫度高、樣品組分疏水性和介質(zhì)配基的疏水性強(qiáng)，介質(zhì)對組分吸附牢。
9.4洗脫
可用以下幾種方式之一進(jìn)行洗脫，也可結(jié)合使用。
⑴降低鹽析離子的濃度或提高鹽溶離子的濃度。
⑵逐漸增加表面活性劑的量。
⑶可通過給洗脫液中加入乙二醇等有機(jī)溶劑以降低極性。
⑷通過降低溫度。
常用的洗脫液是低鹽濃度的緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS。
9.5再生 一般用低鹽濃度的緩沖液洗，洗10倍以上柱體積，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。必要時加表面活性劑和可溶性有機(jī)溶劑洗去雜質(zhì)，再用水、梯度增加乙醇濃度洗、水洗，最后用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡。 |
