螯合高流速瓊脂糖微球（Chelating Bio-sep 6FF）
產品說明書
螯合高流速瓊脂糖微球（Chelating Bio-sep 6FF）是將亞氨基二乙酸基鍵合在高流速瓊脂糖微球上，在螯合金屬離子Zn+2或Ni+3形成的一種親和層析介質。廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質、核酸及多肽的制備。
1. 外觀：本品為白色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質。
2. 理化指標
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項 目 |
指 標 |
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配 基 |
-N(CH2COOH)2 |
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基 質 |
6% 交聯瓊脂糖 |
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形狀 |
球形 |
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粒徑 |
50~160 μm |
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離子結合量（Zn2+） |
24~30μmol/ml |
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最高流速(25℃) |
≧370 cm/h |
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耐 壓 |
0.3 MPa |
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耐 熱 |
pH7.0水中120℃20min |
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pH適用范圍 |
2~14 (短時間)；3~13(長時間) |
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化學穩定性 |
以下溶液中穩定；
1mol/L NaOH;20%EtOH; 0.01mol/L鹽酸； |
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3．包裝
產品以聚胺酯瓶密封包裝，外貼標簽，注明“品名、體積、顆粒大小、保質期、批號、生產日期、生產單位及地址” 等內容。所選用的包裝應有利于保證產品質量、方便運輸和貯存。
4. 運輸
運輸中應避免日曬、雨淋、重壓，嚴禁與有毒、有害物品混運。
5. 貯存
產品應密封貯存在4℃~30℃（保存溶液為20% 乙醇），通風、干燥、清潔的地方。不能冷凍。
用過的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。
6.保質期：暫定5年。
7.應用：螯合瓊脂糖微球是一種親和層析介質，利用樣品中組分中的組氨酸等氨基酸殘基與金屬離子的親和吸附進行分離。用于生物大分子的純化分離。下面簡要介紹介質的使用過程。
7.1 裝柱
⑴ 讓所有的材料和試劑達到室溫。配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。
⑵ 根據柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉20%乙醇，抽干，用緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿。勻漿作脫氣處理。
⑶ 將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務必使底端無氣泡。
⑷ 用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內，注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。
⑸ 打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
7.2 螯合金屬離子
本介質可以根據需要，螯合不同的金屬離子，如Zn+2、Ni+3或Cu+2等。Cu+2與蛋白質結合較強，某些蛋白質只與Cu+2結合；Zn+2與蛋白質結合較弱，可進行選擇性洗脫，得到目標產品；Ni+3可選擇性地與帶組氨酸的蛋白質結合。（用戶可自行螯合，也可選擇購買螯合了離子的介質）
在pH值偏酸性的條件下，讓過量含金屬離子的可溶性鹽溶液緩慢地流過柱子，金屬離子即被螯合在柱子上。
7.2 平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導和pH不變。
7.3 上樣
⑴ 樣品用平衡液配制，常用NaOAC 或PBS緩沖液，pH5.5~8.5。渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。
⑵ 一般情況是讓目標產品結合在柱子上，用平衡液洗去雜質，再選擇一種洗脫液洗下目標產品。
⑶ 介質對樣品組分吸附的程度取決于樣品的性質、金屬離子種類和流動相的性質。
7.4 洗脫
洗脫一般有兩種方式：一是減小pH值，大多數蛋白質在pH 6到4的范圍內可被洗下來；二是用一種競爭試劑，將蛋白質從柱子上置換下來，如用咪唑、組氨酸或氯化銨。用競爭試劑咪唑或減小pH值的洗脫洗下蛋白質，金屬離子仍然在柱子上；若用競爭試劑組氨酸或氯化銨洗脫洗下蛋白質，會將金屬離子和蛋白質的復合物一起洗下來。
洗脫常用增加競爭試劑或減小pH的分段洗脫或梯度洗脫。如0.05mol/L的PBS中含0.01~0.5mol/L的咪唑，做分段洗脫。
7.5 再生
若金屬離子未流失，再生后接著用結合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。若金屬離子已流失或為了保險起見，要重新做螯合金屬離子的7.2操作。若要換掉金屬離子，可用EDTA溶液除去現在螯合的金屬離子，再做新離子的7.2操作。
若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
7.6 在位清洗
⑴ 對于以離子鍵結合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。
⑵ 對沉淀蛋白、對以疏水性結合的蛋白或脂蛋白類，可用1M NaOH 去除。
⑶ 對強疏水性結合的蛋白、脂蛋白類等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產生氣泡。
清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。
7.7 注意
在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進入。
7.8 消毒
用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。
7.9 滅菌
置介質于高壓滅菌鍋中120℃下20分鐘。 |
