藍(lán)色高流速瓊脂糖微球(Blue Bio-Sep 6FF) 產(chǎn)品說明書
藍(lán)色高流速瓊脂糖微球是將藍(lán)色染料F3 GA鍵合在6FF瓊脂糖微球上形成的一種可利用基團(tuán)親和作用來實(shí)現(xiàn)目標(biāo)產(chǎn)品純化分離的親和色譜介質(zhì)。用于生物大分子如白蛋白、核苷酸輔助的酶、干擾素和凝血因子等的純化分離。 1.外觀:本品為藍(lán)色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質(zhì)。 2.理化指標(biāo) 項(xiàng) 目 指 標(biāo) 配 基 F3GA藍(lán)色染料 基 質(zhì) 6% 交聯(lián)高流速瓊脂糖 形狀 球形 粒徑 50~160 μm 蛋白質(zhì)吸附容量(HSA)18mg/ml 最高流速(25℃) 700 cm/h* 耐 壓 0.3 MPa 耐 熱 pH7水中120℃20min 工作溫度 4~40℃ pH適用范圍 3~13 (短時(shí)間);4~12(長(zhǎng)時(shí)間) 化學(xué)穩(wěn)定性 以下溶液中穩(wěn)定; 1mol/L NaOH;70%EtOH;; 8mol/L尿素;3 mol/L(NH4)2SO4 *柱子:內(nèi)徑16mm、柱長(zhǎng)30cm。柱床高5cm,25℃, 流動(dòng)相為0.1mol/LNaCl。 3. 包裝 產(chǎn)品以聚胺酯瓶密封包裝,外貼標(biāo)簽,注明“品名、體積、顆粒大小、保質(zhì)期、批號(hào)、生產(chǎn)日期、生產(chǎn)單位及地址” 等內(nèi)容。所選用的包裝應(yīng)有利于保證產(chǎn)品質(zhì)量、方便運(yùn)輸和貯存。 4. 運(yùn)輸 運(yùn)輸中應(yīng)避免日曬、雨淋、重壓,嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。 5. 貯存 產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~8℃(保存溶液為20% 乙醇+0.1mol/L KH2PO4,pH8.0),通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能冷凍。 用過的柱子貯存在4℃(20% 乙醇+0.1mol/L KH2PO4,pH8.0)。 6.保質(zhì)期:暫定5年。 7.應(yīng)用 藍(lán)色高流速瓊脂糖微球是一種親和色譜介質(zhì),利用樣品中組分與配基親和性的不同進(jìn)行分離。用于用于生物大分子如白蛋白、干擾素和凝血因子等的純化分離。 下面簡(jiǎn)要介紹介質(zhì)的使用過程。 7.1 裝柱 、抛屗械牟牧虾驮噭┻_(dá)到室溫。配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。 如樣品為白蛋白,使用的緩沖液如下: 初始緩沖液(平衡液):0.05mol/ L K2HPO4,pH5~7(pH不同,吸附量不同); 洗脫緩沖液:0.05mol/LKH2PO4+1.5mol/ L KCl,pH7.0。 ⑵根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1的比例)配成勻漿。勻漿作脫氣處理。 ⑶將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務(wù)必使底端無氣泡。 ⑷ 用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,連結(jié)好柱子頂端柱頭。 、 打開蠕動(dòng)泵,讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過,使柱床穩(wěn)定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。 7.2平衡 讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導(dǎo)和pH不變。 7.3上樣 、艠悠酚闷胶庖号渲疲瑴啙岬臉悠芬x心和過濾后上樣。 、埔话闱闆r是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上,用平衡液洗去雜質(zhì)。 7.4洗脫 再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。 7.5再生 一般用高鹽濃度的洗脫緩沖液洗,洗10倍以上柱體積,接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用。 若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。 7.6 在位清洗 ⑴對(duì)沉淀蛋白,可用4倍柱體積0.1mol/L NaOH 低流速洗脫,接著用4倍柱體積2 mol/L KSCN洗滌,馬上用5倍柱體積pH8.0的初始緩沖溶液洗滌。 、 對(duì)強(qiáng)結(jié)合的蛋白、脂類等,用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗,但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,否則容易產(chǎn)生氣泡。再馬上用5倍柱體積pH8.0的緩沖溶液洗滌。 7.7注意 在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候,要避免柱子流干,氣泡進(jìn)入。 7.8滅菌 置介質(zhì)于高壓滅菌鍋中120℃下20分鐘。
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